Lompat ke isi

Alfa-komplementasi: Perbedaan antara revisi

Dari Wikipedia bahasa Indonesia, ensiklopedia bebas
Konten dihapus Konten ditambahkan
25kartika (bicara | kontrib)
Tidak ada ringkasan suntingan
D'SpecialOne (bicara | kontrib)
k +fact, mengubah file -> berkas
Baris 14: Baris 14:
==Struktur Enzim β-Galaktosidase==
==Struktur Enzim β-Galaktosidase==
[[File:LacZ2.jpg|right|thumb|400px|''lacZ'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase]]
[[File:LacZ2.jpg|right|thumb|400px|''lacZ'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase]]
Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 [[asam amino]] yang terbagi dalam 4 subunit. Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses [[tetramerisasi]] yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi [[protein]] tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan [[sisi aktif]] enzim tersebut. Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).<ref name=sAttwood>{{citation
Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 [[asam amino]] yang terbagi dalam 4 subunit.{{fact}} Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses [[tetramerisasi]] yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi [[protein]] tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).<ref name=sAttwood>{{citation
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|first1=Z. F.
|first1=Z. F.
Baris 25: Baris 25:
|isbn=012147370}}
|isbn=012147370}}
</ref> <ref name=Langley_1975>Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.''Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation''.Proc NAT Acad Sci.'''(72)''':1254-1257</ref>
</ref> <ref name=Langley_1975>Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.''Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation''.Proc NAT Acad Sci.'''(72)''':1254-1257</ref>







==Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi==
==Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi==
===''lacZ'''===
===''lacZ'''===
[[File:LacZ'.jpg|right|thumb|300px|''lacZ''', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang hanya mengandung subunit α(terdapat pada vektor plasmid)]]
[[Berkas:LacZ'.jpg|right|thumb|300px|''lacZ''', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang hanya mengandung subunit α(terdapat pada vektor plasmid)]]
'''Gen ''lacZ'''''' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada [[β-galaktosidase]] tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan [[sisi aktif]] enzim tersebut.Hal tersebut diakibatkan karena gen ''[[lacZ]]'' yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam [[vektor]] [[plasmid]], oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.<ref name=sAttwood>{{citation
'''Gen ''lacZ'''''' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada [[β-galaktosidase]] tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Hal tersebut diakibatkan karena gen ''[[lacZ]]'' yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam [[vektor]] [[plasmid]], oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.<ref name=sAttwood>{{citation
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|first1=Z. F.
|first1=Z. F.
Baris 44: Baris 41:
|isbn=012147370}}
|isbn=012147370}}
</ref>
</ref>







===''lacZ∆M15''===
===''lacZ∆M15''===
[[File:LacZ∆M15 .jpg|right|thumb|400px|''lacZ∆M15'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang telah mengalami delesi pada subunit α nya(terdapat pada [[DNA]] [[kromosom]] [[bakteri]])]]
[[Berkas:LacZ∆M15 .jpg|right|thumb|400px|''lacZ∆M15'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang telah mengalami delesi pada subunit α nya(terdapat pada [[DNA]] [[kromosom]] [[bakteri]])]]
Gen ''lacZ∆M15'' adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami [[delesi]] sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’. Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan [[tetramerisasi]] yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.<ref name=sAttwood>{{citation
Gen ''lacZ∆M15'' adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami [[delesi]] sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’.{{fact}} Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan [[tetramerisasi]] yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.<ref name=sAttwood>{{citation
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications
|first1=Z. F.
|first1=Z. F.
Baris 63: Baris 55:
|isbn=012147370}}
|isbn=012147370}}
</ref>
</ref>







==Mekanisme==
==Mekanisme==
Gen lacZ dalam proses [[kloning]] DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning. Hal ini disebabkan karena adanya [[MCR]] (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.
Gen lacZ dalam proses [[kloning]] DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning.{{fact}} Hal ini disebabkan karena adanya [[MCR]] (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.{{fact}}


===Tidak terdapat insert pada vektor kloning===
===Tidak terdapat insert pada vektor kloning===
lacZ akan di[[transkripsi]] secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah [[X-gal]] menjadi [[galaktosa]] dan turunan [[indoksil]]. Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna [[koloni]] menjadi biru.<ref name=Nichol>{{citation
lacZ akan di[[transkripsi]] secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah [[X-gal]] menjadi [[galaktosa]] dan turunan [[indoksil]].{{fact}} Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna [[koloni]] menjadi biru.<ref name=Nichol>{{citation
|title=An Introduction to Genetic Engineering
|title=An Introduction to Genetic Engineering
|last1=Nichol
|last1=Nichol
Baris 86: Baris 73:


===Terdapat insert pada vektor kloning===
===Terdapat insert pada vektor kloning===
Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh [[RNA polimerase]]. Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.<ref name=Nichol>{{citation
Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh [[RNA polimerase]].{{fact}} Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.<ref name=Nichol>{{citation
|title=An Introduction to Genetic Engineering
|title=An Introduction to Genetic Engineering
|last1=Nichol
|last1=Nichol

Revisi per 23 April 2010 23.57

α-komplementasi merupakan fenomena dimana subunit α dari enzim β-galaktosidase yang berasal dari vektor plasmid dapat mengaktifkan enzim β-galaktosidase yang gennya(lacZ) telah menjadi mutan pada DNA kromosom bakteri sehingga enzim tersebut dapat menjadi enzim yang fungsional.[1] [2]

Struktur Enzim β-Galaktosidase

lacZ, gen yang menyandikan beta-galaktosidase

Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 asam amino yang terbagi dalam 4 subunit.[butuh rujukan] Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses tetramerisasi yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi protein tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan sisi aktif enzim tersebut.[butuh rujukan] Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).[3] [4]


Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi

lacZ'

lacZ', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang hanya mengandung subunit α(terdapat pada vektor plasmid)

Gen lacZ' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada β-galaktosidase tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan sisi aktif enzim tersebut.[butuh rujukan] Hal tersebut diakibatkan karena gen lacZ yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam vektor plasmid, oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.[3]

lacZ∆M15

lacZ∆M15, gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang telah mengalami delesi pada subunit α nya(terdapat pada DNA kromosom bakteri)

Gen lacZ∆M15 adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami delesi sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’.[butuh rujukan] Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan tetramerisasi yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.[3]

Mekanisme

Gen lacZ dalam proses kloning DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning.[butuh rujukan] Hal ini disebabkan karena adanya MCR (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.[butuh rujukan]

Tidak terdapat insert pada vektor kloning

lacZ akan ditranskripsi secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah X-gal menjadi galaktosa dan turunan indoksil.[butuh rujukan] Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna koloni menjadi biru.[5] [2]

Terdapat insert pada vektor kloning

Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh RNA polimerase.[butuh rujukan] Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.[5] [2]

Referensi

  1. ^ Attwood, T. K.; Cammack, R. (2006), Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology (edisi ke-2nd), New York: Oxford University Press,Inc;, ISBN 0198529171 
  2. ^ a b c Welply JK, Fowler AV,Zabin I.1981.Beta-Galactosidase alpha-Complementation.J Biol Chem.(256):6804-6810.
  3. ^ a b c Burton, Z. F.; Kaguni, J. M. (1997), Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications, California: Academic Press, ISBN 012147370 Periksa nilai: length |isbn= (bantuan) 
  4. ^ Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation.Proc NAT Acad Sci.(72):1254-1257
  5. ^ a b Nichol; Desmond, S. T. (2002), An Introduction to Genetic Engineering, New York: Cambridge University Press, ISBN 0521808677