Alfa-komplementasi: Perbedaan antara revisi
Tidak ada ringkasan suntingan |
k +fact, mengubah file -> berkas |
||
| Baris 14: | Baris 14: | ||
==Struktur Enzim β-Galaktosidase== |
==Struktur Enzim β-Galaktosidase== |
||
[[File:LacZ2.jpg|right|thumb|400px|''lacZ'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase]] |
[[File:LacZ2.jpg|right|thumb|400px|''lacZ'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase]] |
||
Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 [[asam amino]] yang terbagi dalam 4 subunit. Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses [[tetramerisasi]] yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi [[protein]] tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan [[sisi aktif]] enzim tersebut. Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).<ref name=sAttwood>{{citation |
Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 [[asam amino]] yang terbagi dalam 4 subunit.{{fact}} Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses [[tetramerisasi]] yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi [[protein]] tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).<ref name=sAttwood>{{citation |
||
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications |
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications |
||
|first1=Z. F. |
|first1=Z. F. |
||
| Baris 25: | Baris 25: | ||
|isbn=012147370}} |
|isbn=012147370}} |
||
</ref> <ref name=Langley_1975>Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.''Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation''.Proc NAT Acad Sci.'''(72)''':1254-1257</ref> |
</ref> <ref name=Langley_1975>Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.''Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation''.Proc NAT Acad Sci.'''(72)''':1254-1257</ref> |
||
==Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi== |
==Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi== |
||
===''lacZ'''=== |
===''lacZ'''=== |
||
[[ |
[[Berkas:LacZ'.jpg|right|thumb|300px|''lacZ''', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang hanya mengandung subunit α(terdapat pada vektor plasmid)]] |
||
'''Gen ''lacZ'''''' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada [[β-galaktosidase]] tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan [[sisi aktif]] enzim tersebut.Hal tersebut diakibatkan karena gen ''[[lacZ]]'' yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam [[vektor]] [[plasmid]], oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.<ref name=sAttwood>{{citation |
'''Gen ''lacZ'''''' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada [[β-galaktosidase]] tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan [[sisi aktif]] enzim tersebut.{{fact}} Hal tersebut diakibatkan karena gen ''[[lacZ]]'' yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam [[vektor]] [[plasmid]], oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.<ref name=sAttwood>{{citation |
||
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications |
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications |
||
|first1=Z. F. |
|first1=Z. F. |
||
| Baris 44: | Baris 41: | ||
|isbn=012147370}} |
|isbn=012147370}} |
||
</ref> |
</ref> |
||
===''lacZ∆M15''=== |
===''lacZ∆M15''=== |
||
[[ |
[[Berkas:LacZ∆M15 .jpg|right|thumb|400px|''lacZ∆M15'', gen yang menyandikan beta-galaktosidase yang telah mengalami delesi pada subunit α nya(terdapat pada [[DNA]] [[kromosom]] [[bakteri]])]] |
||
Gen ''lacZ∆M15'' adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami [[delesi]] sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’. Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan [[tetramerisasi]] yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.<ref name=sAttwood>{{citation |
Gen ''lacZ∆M15'' adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami [[delesi]] sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’.{{fact}} Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan [[tetramerisasi]] yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.<ref name=sAttwood>{{citation |
||
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications |
|title=Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications |
||
|first1=Z. F. |
|first1=Z. F. |
||
| Baris 63: | Baris 55: | ||
|isbn=012147370}} |
|isbn=012147370}} |
||
</ref> |
</ref> |
||
==Mekanisme== |
==Mekanisme== |
||
Gen lacZ dalam proses [[kloning]] DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning. Hal ini disebabkan karena adanya [[MCR]] (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase. |
Gen lacZ dalam proses [[kloning]] DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning.{{fact}} Hal ini disebabkan karena adanya [[MCR]] (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.{{fact}} |
||
===Tidak terdapat insert pada vektor kloning=== |
===Tidak terdapat insert pada vektor kloning=== |
||
lacZ akan di[[transkripsi]] secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah [[X-gal]] menjadi [[galaktosa]] dan turunan [[indoksil]]. Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna [[koloni]] menjadi biru.<ref name=Nichol>{{citation |
lacZ akan di[[transkripsi]] secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah [[X-gal]] menjadi [[galaktosa]] dan turunan [[indoksil]].{{fact}} Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna [[koloni]] menjadi biru.<ref name=Nichol>{{citation |
||
|title=An Introduction to Genetic Engineering |
|title=An Introduction to Genetic Engineering |
||
|last1=Nichol |
|last1=Nichol |
||
| Baris 86: | Baris 73: | ||
===Terdapat insert pada vektor kloning=== |
===Terdapat insert pada vektor kloning=== |
||
Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh [[RNA polimerase]]. Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.<ref name=Nichol>{{citation |
Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh [[RNA polimerase]].{{fact}} Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.<ref name=Nichol>{{citation |
||
|title=An Introduction to Genetic Engineering |
|title=An Introduction to Genetic Engineering |
||
|last1=Nichol |
|last1=Nichol |
||
Revisi per 23 April 2010 23.57
α-komplementasi merupakan fenomena dimana subunit α dari enzim β-galaktosidase yang berasal dari vektor plasmid dapat mengaktifkan enzim β-galaktosidase yang gennya(lacZ) telah menjadi mutan pada DNA kromosom bakteri sehingga enzim tersebut dapat menjadi enzim yang fungsional.[1] [2]
Struktur Enzim β-Galaktosidase
Enzim β-galaktosidase terdiri atas 146 asam amino yang terbagi dalam 4 subunit.[butuh rujukan] Bagian yang dekat dengan ujung 5’ pada gen lacZ mengkodekan subunit α yang berfungsi dalam proses tetramerisasi yaitu proses pembentukan struktur 3 dimensi protein tersebut, sementara itu bagian yang dekat dengan ujung 3’ pada lacZ mengkodekan sisi aktif enzim tersebut.[butuh rujukan] Keempat subunit β-galaktosidase harus berkumpul untuk membentuk satu enzim yang fungsional).[3] [4]
Bagian yang terlibat dalam alfa-komplementasi
lacZ'
Gen lacZ' merupakan gen yang hanya mengandung subunit α pada β-galaktosidase tetapi tidak mengandung gen yang menyandikan sisi aktif enzim tersebut.[butuh rujukan] Hal tersebut diakibatkan karena gen lacZ yaitu gen yang menyandikan β-galaktosidase merupakan gen yang cukup besar jika ditaruh seluruhnya di dalam vektor plasmid, oleh sebab itu, dalam vektor plasmid hanya terkandung sebagian dari gen yang menyandikan β-galaktosidase untuk menjaga ukuran plasmid agar tetap kecil.[3]
lacZ∆M15
Gen lacZ∆M15 adalah gen penyandi β-galaktosidase yang terdapat pada DNA kromosom bakteri yang telah mengalami delesi sebanyak 90 pasang basa pada sekuens yang dekat dengan ujung 5’.[butuh rujukan] Hal tersebut mengakibatkan subunit α pada enzim β-galaktosidase kehilangan 30 asam amino sehingga tidak dapat melakukan tetramerisasi yaitu yang berhubungan dengan pelipatan protein sehingga enzim ini menjadi tidak fungsional.[3]
Mekanisme
Gen lacZ dalam proses kloning DNA berfungsi sebagai gen pelapor, yaitu gen yang ekspresinya bergantung pada masuk atau tidaknya insert pada vektor kloning.[butuh rujukan] Hal ini disebabkan karena adanya MCR (Multiple Cloning Site) diantara gen penyandi β-galaktosidase.[butuh rujukan]
Tidak terdapat insert pada vektor kloning
lacZ akan ditranskripsi secara normal dan dapat membentuk α-complementaion menjadi β-galaktosidase yang dapat memecah X-gal menjadi galaktosa dan turunan indoksil.[butuh rujukan] Turunan tersebut selanjutnya akan dioksidasi sehingga membentuk turunan dibromo-dikloro yang menyebabkan berubahnya warna koloni menjadi biru.[5] [2]
Terdapat insert pada vektor kloning
Akan terdapat tambahan gen insert yang ikut ditranskripsi oleh RNA polimerase.[butuh rujukan] Hal tersebut menyebabkan gen tersebut tidak dapat membentuk enzim β-galaktosidase yang fungsional dan X-gal tidak akan dipecah sehingga koloni yang dihasilkan tetap berwarna putih.[5] [2]
Referensi
- ^ Attwood, T. K.; Cammack, R. (2006), Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology (edisi ke-2nd), New York: Oxford University Press,Inc;, ISBN 0198529171
- ^ a b c Welply JK, Fowler AV,Zabin I.1981.Beta-Galactosidase alpha-Complementation.J Biol Chem.(256):6804-6810.
- ^ a b c Burton, Z. F.; Kaguni, J. M. (1997), Experiment in Molecular Biology:Biochemical Applications, California: Academic Press, ISBN 012147370 Periksa nilai: length
|isbn=(bantuan) - ^ Langley KE,Villarejo MR,Fowler AV,Zamenhof PJ,Zabin I.1975.Molecular Basis of β-Galactosidase α-Complementation.Proc NAT Acad Sci.(72):1254-1257
- ^ a b Nichol; Desmond, S. T. (2002), An Introduction to Genetic Engineering, New York: Cambridge University Press, ISBN 0521808677